PCR（Polymerase Chain Reaction; ポリメラーゼ連鎖反応）は、DNAポリメラーゼを用いて、わずか数分子のターゲット核酸から数ミリグラムのDNAを増幅する、分子生物学実験ではポピュラーなアプリケーションです。応用範囲が広く、分子生物学の研究以外にも様々な領域で利用されています。
ポイントを押さえて条件を最適化することで、より正確な結果をより低コストで得ることができます。
動画で学ぶPCR/qPCR/RT-PCR
- プライマー＆プローブのデザイン
- レポーター＆クエンチャーの選び方
- アッセイデザインの構築
- リファレンス遺伝子の選定
- MIQE
など、基本原理から実施するときのポイントを学べます。
動画リストはこちら
人気のDNAポリメラーゼ
よく使用されているDNAポリメラーゼ製品をご紹介します。
| 人気のポイント |
PCRバッファー |
MgCl2 |
dNTP |
泳動確認用色素 |
製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| リーズナブルな価格でルーチンのPCRの定番。 |
付属（10x） |
含 |
|
|
Taq DNAポリメラーゼ |
定番のTaq DNAポリメラーゼとMgCl2の混合溶液。 |
D1806 |
| ルーチンのPCRで条件検討に最適。 |
付属（10x） |
付属 |
|
|
Taq DNAポリメラーゼ |
定番のTaq DNAポリメラーゼにMgCl2溶液が別途付属しているため条件検討に最適です。 |
D4545 |
| 分注作業を簡単にできる2x反応液ミックス。 |
含 |
含 |
含 |
|
ReadyMix Taq PCR反応液 |
そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）のため、テンプレートDNAとプライマーを混合するだけで簡単にPCR反応液が調製できます。 |
P4600 |
| ホットスタートPCR用の2x反応液ミックス。 |
含 |
含 |
含 |
|
JumpStart Taq ReadyMix反応液 |
そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）のため、テンプレートDNAとプライマーを混合するだけで簡単にPCR反応液が調製できます。 |
P2893 |
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一般的なPCR
Taq DNA polymerase製品に付属している反応バッファ-は、MgCl2を含む製品とMgCl2を含まない製品をご用意しています。MgCl2を含まない製品は別途MgCl2溶液が付属しているため条件検討に有用です。またREDTaqシリーズは、PCR反応液中にあらかじめ赤色の色素が含まれているため、PCR後に電気泳動する際にトラッキング用の色素を入れる必要がありません。
| PCRバッファー |
MgCl2 |
dNTP |
泳動確認用色素 |
製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| 付属（10x） |
含 |
|
|
Taq DNAポリメラーゼ |
定番のTaq DNAポリメラーゼとMgCl2の混合溶液。 |
D1806 |
| 付属（10x） |
付属 |
|
|
Taq DNAポリメラーゼ |
MgCl2溶液が別途付属のため条件検討に最適です。 |
D4545 |
| 付属（10x） |
含 |
|
含 |
REDTaq DNAポリメラーゼ Taq |
赤い色素入りで電気泳動の移動を確認可能。 |
D4309 |
| 含 |
含 |
含 |
|
ReadyMix Taq PCR反応液 |
そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）のため、テンプレートDNAとプライマーを混合するだけで簡単にPCR反応液が調製できます。 |
P4600 |
| 含 |
含 |
含 |
含 |
REDTaq ReadyMix PCR反応ミックス |
そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）のため、テンプレートDNAとプライマーを混合するだけで簡単にPCR反応液が調製できます。赤い色素入りで電気泳動の移動を確認可能。 |
R2523 |
| 付属（5x） |
付属 |
|
|
GC-RICH PCRシステム |
GCリッチ領域の増幅用に適したTaq DNAポリメラーゼとプルーフリーディング活性を持つポリメラーゼのブレンドです。ロシュ社製。 |
12140306001 |
| 付属（5x） |
付属 |
付属 |
|
GC-RICH PCRシステム、dNTPack |
GCリッチ領域の増幅用に適したTaq DNAポリメラーゼとプルーフリーディング活性を持つポリメラーゼのブレンドです。ロシュ社製。 |
4743784001 |
| 付属（10x） |
付属 |
|
含 |
REDTaq ゲノムDNAポリメラーゼ |
ゲノムなどの複雑なテンプレートの増幅に最適です。 |
D2812 |
| 付属（10x） |
含 |
|
含 |
REDTaq ゲノムDNAポリメラーゼ |
ゲノムなどの複雑なテンプレートの増幅に最適です。 |
D8312 |
| 付属（10x） |
含 |
付属 |
|
Taq DNAポリメラーゼ、5U/μl、dNTPack |
一般的なPCRによく使われています。ロシュ社製。 |
TAQN-RO |
| 付属（10x） |
含 |
|
|
Taq DNAポリメラーゼ、 5U/μl |
一般的なPCRによく使われています。ロシュ社製。 |
TAQ-RO |
| 付属（10x） |
含 |
|
|
エキスパンド ロング テンプレートPCRシステム |
非
常に長いDNAテンプレートを増幅するために特別に調合された、Taq DNAポリメラーゼおよびTgo
DNAポリメラーゼのブレンドです。0.5-12 kb、12-15 kb、15
kb以上のフラグメントの増幅に適する3種類の緩衝液が添付されています。ロシュ社製。 |
ELONG-RO |
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ホットスタートPCR
PCR反応液の調製中にプライマーがテンプレートDNAに結合して非特異的な増幅が起きたり、プライマー同士が結合してしまうことがあります。これを防ぐためPCRの反応前にDNAポリメラーゼの活性を抑えておく方法が考案され、その方法のひとつとしてホットスタートPCR法がよく用いられています。
SigmaのJumpStart Taq DNAポリメラーゼは抗体によって不活性化され、PCRサイクル初期の熱変性ステップによって抗体が変性してDNAポリメラーゼから離れることでDNAポリメラーゼが活性化状態に戻り、PCR反応が進みます。このことによって高い特異性のあるPCR産物が得られます。
| PCRバッファー |
MgCl2 |
dNTP |
泳動確認用色素 |
製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| 付属（10x） |
含 |
|
|
JumpStart Taq DNAポリメラーゼ |
Taq DNAポリメラーゼとMgCl2の混合溶液。 |
D9307 |
| 付属（10x） |
付属 |
|
|
JumpStart Taq DNAポリメラーゼ |
MgCl2溶液が別途付属のため条件検討に最適です。 |
D4184 |
| 付属（10x） |
含 |
|
含 |
JumpStart REDTaq DNAポリメラーゼ |
Taq DNAポリメラーゼとMgCl2の混合溶液。赤い色素入りで電気泳動の移動を確認可能。 |
D8187 |
| 含 |
含 |
含 |
|
JumpStart Taq ReadyMix反応液 |
そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）のため、テンプレートDNAとプライマーを混合するだけで簡単にPCR反応液が調製できます。 |
P2893 |
| 含 |
含 |
含 |
含 |
JumpStart REDTaq ReadyMix反応液 |
そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）のため、テンプレートDNAとプライマーを混合するだけで簡単にPCR反応液が調製できます。赤い色素入りで電気泳動の移動を確認可能。 |
P0982 |
| 含 |
含 |
含 |
含 |
JumpStart REDTaq ReadyMix反応液 |
ゲノム増幅に適したブレンド。そのまま使えるReadyMix溶液（2x濃度）。複雑なテンプレートやゲノムをテンプレートに最適化された組成になっています。 |
P1107 |
| 付属（10x） |
含 |
|
|
JumpStart AccuTaq LA DNA ポリメラーゼ |
正確性が高く、長いPCRに最適化されています。単純なテンプレートでは40kbまで増幅可能。 |
D5809 |
| 付属（10x） |
含 |
|
含 |
JumpStart REDAccuTaq LA DNA ポリメラーゼ |
正確性が高く、長いPCRに最適化されています。単純なテンプレートでは40kbまで増幅可能。 |
D1313 |
| 付属（5x） |
付属 |
|
|
AptaTaq Fast DNAポリメラーゼ |
伸長時間を短縮でき、ホットスタートPCR用のリコンビナントTaqポリメラーゼ。ロシュ社製品。 |
APTAT-RO |
| 含 |
含 |
含 |
|
AptaTaq Fast PCRマスター |
AptaTaq Fast DNAポリメラーゼ，反応バッファー，ヌクレオチド（dATP、dCTP、dGTP、dUTP）を含むマスターミックス。ロシュ社製品。 |
ATPAM-RO |
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高フィディリティPCR
プルーフリーディングによる高い正確性、dUTPとウラシルDNAグリコシラーゼによるキャリーオーバーコンタミネーションを予防する製品などをご用意しています。
FastStart High Fidelity PCRシステム
| 製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| FastStart High Fidelity PCRシステム |
ホットスタート用に修飾されたTaq DNAポリメラーゼとプルーフリーディングタンパク質のブレンドにより高い正確性で5kbまでのDNAを増幅できます。ロシュ社製。 |
FHIFI-RO |
| FastStart High Fidelity PCRシステム、dNTPack |
ヌクレオチドミックス付属。ロシュ社製。 |
FHIFIN-RO |
Expand High Fidelity PCRシステム
| 製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステム |
Taq DNA ポリメラーゼと優れたプルーフリーディング能を持つTgo DNA ポリメラーゼのブレンドにより高い正確性でDNAを増幅できます。ロシュ社製。 |
EHIFI-RO |
| エキスパンド ハイフィディリティ PCRシステム、dNTPack |
ヌクレオチドミックス付属。ロシュ社製。 |
EHIFIDNTP-RO |
Expand High Fidelity PLUS PCRシステム
| 製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| エキスパンド ハイフィディリティ PLUS PCRシステム |
Taq DNA ポリメラーゼとプルーフリーディングタンパク質のブレンドにより高い正確性でDNAを増幅できます。ロシュ社製。また、別売のdUTPとウラシルDNAグリコシラーゼを用いることでキャリーオーバーによるコンタミを防止することができます。 |
EHIFIP-RO |
| エキスパンド ハイフィディリティ PLUS PCRシステム、dNTPack |
ヌクレオチドミックス付属。ロシュ社製。 |
EHIFIPN-RO |
Pwo Super Yield DNA ポリメラーゼ
| 製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| PwoスーパーイールドDNAポリメラーゼ |
PwoスーパーイールドDNAポリメラーゼの持つ3‘-5’ エクソヌクレアーゼのプルーフリーディング活性によりTaq DNAポリメラーゼの18倍の正確性がもたらされます。ロシュ社製。 |
PWOSUP-RO |
| PwoスーパーイールドDNAポリメラーゼ、dNTPack |
ヌクレオチドミックス付属。ロシュ社製。 |
4743750001 |
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逆転写PCR（RT-PCR）
RNAは逆転写酵素によって一本鎖の相補的なDNA（cDNA）を合成することができ、そのcDNAをPCRすることで二本鎖のDNAが得られます。この一連の操作はRT-PCRと呼ばれ、逆転写とPCR増幅をツーステップに分けて行う方法と逆転写からPCR増幅までワンステップで行う方法があります。
ツーステップRT-PCRはランダムプライマー、オリゴdTプライマー（または遺伝子特異的プライマー）を用いた逆転写によってcDNA合成し、目的に応じて遺伝子をPCR増幅することができます。ツーステップに分けることで様々な反応条件に対応でき、cDNAは長期間保存できるという利点があります。
ワンステップRT-PCRは1本のチューブ内で反応が完了するためコンタミのリスクが少なく、遺伝子特異的なプライマーを使うため検出感度が高くなるという利点があります。
| 製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| RT-PCR（AMV）用ファーストストランドcDNA合成キット |
リバーストランスクリプターゼAMVを用いてRNAから1本鎖cDNAを合成するためのキットです。ロシュ社製。 |
11483188001 |
| Titan ワンチューブRT-PCRシステム |
ワンチューブRT-PCR用の酵素ミックス（エキスパンドハイフィディリティ酵素ブレンドとAMVリバーストランスクリプターゼ）。100反応分。RT-PCR反応バッファー、塩化マグネシウム溶液、DTT溶液が付属します。ロシュ社製。 |
11855476001 |
| Titan ワンチューブRT-PCRキット |
ワンチューブRT-PCR用の酵素ミックス（エキスパンドハイフィディリティ酵素ブレンドとAMVリバーストランスクリプターゼ）およびdNTP、RNaseインヒビター、コントロールが付属しているキット。50反応分。ロシュ社製。 |
11939823001 |
| リAMV逆転写酵素 |
RNAからの1本鎖cDNA合成に使用されます。ロシュ社製。 |
10109118001 |
| M-MLV逆転写酵素 |
RNAからの1本鎖cDNA合成に使用されます。 |
M1302 |
| Tth DNA Polymerase |
マンガンイオン存在下でRNAを鋳型としてDNAを合成します。ロシュ社製。 |
11480022001 |
| プライマーp(dT)15、cDNA合成用 |
1 A260ユニット（40μg、8 nmol）。ロシュ社製。 |
10814270001 |
| ランダムプライマー（ヘキサマー） |
50 A260ユニット（2 mg、1 μmol）。ロシュ社製。 |
11034731001 |
| プロテクター RNaseインヒビター |
RNA分解酵素からRNAを保護します。ロシュ社製。 |
RNAINH-RO |
| DNase I Amplification Grade |
DNase IはDNAをオリゴおよびモノヌクレオチドに分解する酵素でRNAサンプルからDNAを除去するために利用されます。DNase I Amplification GradeはRNaseを含まないため、DNAの混入にセンシティブなRT-PCRなどのアプリケーションに適しています。 |
AMPD1 |
| RNaseZAP |
ガラスやプラスチックの表面からRNaseを除去するための試薬です。ペーパータオルでふくか溶液に浸けるだけで簡単に除去できます。 |
R2020 |
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PCR関連製品
製品一覧はこちら。
| 製品名 |
製品情報 |
製品番号 |
|---|
| 10mM デオキシヌクレオチド混合溶液（x50） |
各10mMのdATP、dCTP、dGTP、TTPを含有した混合溶液。 |
D7295 |
| 塩化マグネシウム溶液 |
25mM溶液。 |
M8787 |
| PCRバッファーセット |
PCRの条件検討に利用されています。10xPCRバッファーと塩化マグネシウム溶液のセット。 |
11699121001 |
| 水、PCR用 |
PCRに適した水。 |
W1754 |
| ジメチルスルホキシド |
DMSOは特に長鎖のPCRで収率が向上することがあります。 |
D9170 |
| ベタイン、5M溶液 |
ベタインは高GC含量領域での2次構造の形成を抑え、増幅効率を上げる事ができます。 |
B0300 |
| ミネラルオイル |
DNase、RNase、プロテアーゼフリー |
M8662 |
| ウラシル-DNAグリコシラーゼ、熱感受性 |
キャリーオーバーコンタミネーション防止に使用されます。 |
UDGHL-RO |
| プロテイナーゼ K、Tritirachium album由来 |
分子生物学用、凍結乾燥粉末 |
P2308 |
| プロティナーゼK、リコンビナント |
PCRグレード、凍結乾燥粉末 |
RPROTK-RO |
| プロティナーゼK、リコンビナント、溶液 |
PCRグレード、溶液 |
RPROTKSOL-RO |
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